一、抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒實驗中抗體的結(jié)構(gòu)
抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白 (immunoglobulin,Ig)。Ig 分五類，即IgG、IgA 、IgM、IgD 和IgE。與免疫測定有關(guān)的Ig 主要為 IgG 和IgM。Ig 由兩個輕鏈(L)和兩個重鏈(H)的單體組成。Ig 的輕鏈是相同的，有κ(kappa)和λ(Lambda )兩種型別。五類Ig 的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG 和IgM 的重鏈分別稱為γ(gamma )鏈和μ(mu )鏈。重鏈和輕鏈的 N 端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH 和VL 表示。兩者構(gòu)成抗體的抗原結(jié)合部位，只與相應(yīng)的抗原決定簇匹配，發(fā)生特異性結(jié)合，是抗體專一性結(jié)合抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
IgG 可被木瓜蛋白酶分解為三個區(qū)段，其中兩個相同的區(qū)段稱抗原結(jié)合片段(Fab )。每個Fab 都保存結(jié)合抗原的能力，但只有一個抗原結(jié)合位點，是單價的，與抗原結(jié)合后不出現(xiàn)凝集或沉淀。另一區(qū)段稱Fc 段，無抗體活性，但具有IgG *的抗原性。
IgG 可被分解為兩個片段，一個Fab 雙體，稱F(ab’)2，能和兩個相同的抗原結(jié)合;另一片段類似Fc，隨后被分解成小分子多肽，無生物活性。
IgM 是由五個單體組成的五聚體，含 10 個重鏈和10 個輕鏈，具有10 個抗原結(jié)合價，由于空間位置的影響，只表現(xiàn)為五個抗原結(jié)合價。IgM 分子量約為900000， IgG 分子量約為150000 。
機體被微生物感染后，先產(chǎn)生 IgM 抗體，然后產(chǎn)生IgG 抗體。經(jīng)過一段時間，IgM 抗體量逐漸減少而消失，而IgG 抗體可存在，在疾病*后可持續(xù)數(shù)年之久。IgM 抗體一般為保護性抗體具有免疫性。因此IgM 抗體的測定，對某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價值。右圖為為甲型肝炎病人血清中IgG 抗體和IgM 抗體出現(xiàn)的時間和水平。
二、 抗原抗體反應(yīng)
2.1 可逆性
Ag·Ab 的解離程度與K 值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性，因此可用親和層析法來提純抗原或抗體。在抗血清中，特異性的IgG 抗體僅占總IgG 中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體，應(yīng)用于免疫測定中可得到更好的效果。
2.2 zui適比例
在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復(fù)合物(沉淀)的量見圖1-4。曲線的高峰部分是抗原抗體比例zui合適的范圍，稱為等價帶(zone of equivalence )。在等價帶前后分別為抗體過剩帶和抗原過剩帶。
如果抗原或抗體極度過剩，則無沉淀物形成，抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒在免疫測定中稱為帶現(xiàn)象(zone phenomenon )。抗體過量稱為前帶(prezone)，抗原地過量稱為后帶(postzone)。在用免疫學(xué)方法測定抗原時，應(yīng)使反應(yīng)系統(tǒng)中有足夠的抗體量，否則測得的量會小于實際含量，甚至出現(xiàn)假陰性。
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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒
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