細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠海綿體內(nèi)皮分離自海綿體組織；陰莖海綿體是由海綿狀的小梁和腔隙構(gòu)成的血竇結(jié)構(gòu)，它主要包括海綿體內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞3種細(xì)胞成分。其中平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞鑲嵌于海綿體細(xì)胞外基質(zhì)的膠原中，而海綿體內(nèi)皮細(xì)胞則覆蓋于海綿體血竇的腔面，僅占海綿體組織的2.8%。在消化海綿體組織時(shí)，膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細(xì)胞與基膜的聯(lián)系，破壞海綿體內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接。如果消化時(shí)間延長(zhǎng)或膠原酶濃度過(guò)大，平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞也將被消化下來(lái)，從而影響海綿體內(nèi)皮細(xì)胞的純度。因此，比較篩選合適的膠原酶濃度和消化時(shí)間是成功分離海綿體內(nèi)皮細(xì)胞的關(guān)鍵。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠海綿體內(nèi)皮采用混合酶消化法結(jié)合機(jī)械分離法、并用內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠海綿體內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： Lptn ELISA Kit

Mouse hepatitis B core aibody (HBcAb) ELISA Kit 小鼠乙型肝核心抗體(HBcAb)檢測(cè)試劑盒

RatPerinuclearai-neuophilcytoplasmicaibody,pANCAELISAKit 大鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGATA4ELISAKitmuman人GATA結(jié)合蛋白4檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞合成酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

RatP-SelectinELISAKit大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CLEC1A重組大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

GIP (Gastric Inhibitory polypeptide 0.5mgGIP (Gastric Inhibitory polypeptide) 胃泌素抑制肽(抗原)

FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated Protein

FAM19A2 Protein Human 重組人 FAM19A2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

FCGR4 Protein Mouse 重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽)

GIP (Gastric Inhibitory polypeptide 0.5mgGIP (Gastric Inhibitory polypeptide) 胃泌素抑制肽(抗原)

FAM19A2 Protein Human 重組人 FAM19A2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CLEC1A重組大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

FCGR4 Protein Mouse 重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽)

FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated Protein

小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat Mueller tube inhibitory substance / ai Mueller tube hormone (MIS/AMH) ELISA Kit 大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)檢測(cè)試劑盒

HumanC-typenaiureticpeptide,CNPELISAKit 人C型尿肽(CNP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-rabiesvirusaibody,ai-RV檢測(cè)試劑盒人抗狂犬病毒抗體(ai-RV)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物氧化酶活性測(cè)定試劑盒20次

Humaumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand1,AIL-R1ELISAKit人壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(AIL-R1)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠海綿體內(nèi)皮細(xì)胞小鼠P物質(zhì)檢測(cè)試劑盒   小鼠P物質(zhì)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠P物質(zhì)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠P物質(zhì)試劑盒、小鼠P物質(zhì)eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠p53檢測(cè)試劑盒   小鼠p53試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠p53試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠p53試劑盒、小鼠p53eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠N端前腦素檢測(cè)試劑盒   小鼠N端前腦素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠N端前腦素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠N端前腦素試劑盒、小鼠N端前腦素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠L選擇素檢測(cè)試劑盒   小鼠L選擇素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠L選擇素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠L選擇素試劑盒、小鼠L選擇素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。