實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠精原干分離自睪丸組織；精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內的一群生精干細胞，是成體內的定向干細胞。精原干細胞的一些優(yōu)勢使其成為動物轉基因的理想宿主細胞。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項生命活動的調節(jié)機制的深入研究，精子發(fā)生機理的進一步闡明以及精原干細胞轉染，異體、異種移植技術的實際應用，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養(yǎng)。在哺乳動睪丸內，精子發(fā)生時一個受高度調控和持續(xù)的過程，精原干細胞（SSCs）一方面進行自我更新維持干細胞數量，另一方面又不斷執(zhí)行分化成各級生精細胞直至后生成精子。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處，是哺乳動物精子發(fā)生的原始細胞，也是動物體內一起能將遺傳信息傳遞的干細胞。精原干細胞體外培養(yǎng)體系的建立，在生物學、醫(yī)學、畜牧業(yè)生產及制備轉基因動物等領域具有廣闊的應用前景。精原干細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動物體內能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠精原干采用先機械吹打、后消化，結合Percoll密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠精原干經CD44免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 球形

傳代特性 可傳2-3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠白介素15(IL-15)檢測試劑盒 ，英文名： IL-15 ELISA Kit

Mouse pyruvate kinase (PK) ELISA Kit 小鼠酸激酶(PK)檢測試劑盒

ELISA 小鼠抑制素B(mouse Inhibin B)  進口分裝

CLIAKitforIL-2R(MouseIerleukin-2receptor)ELISAkit小鼠白介素2受體

通用型離子(K)濃度化學比色法定量檢測試劑盒50次

ELISAKitN-AChR大鼠型乙酰受體

CD47重組大鼠 CD47 蛋白 Protein

FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T細胞轉錄因子)抗原

MICA重組人 MICA 蛋白 Protein

CST9L Protein Human 重組人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 標簽)

EPHA6 Protein Mouse 重組小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)

FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T細胞轉錄因子)抗原

CST9L Protein Human 重組人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 標簽)

CD47重組大鼠 CD47 蛋白 Protein

EPHA6 Protein Mouse 重組小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)

MICA重組人 MICA 蛋白 Protein

小鼠內皮型合成酶(eNOS)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human spleen tyrosine kinase (Syk) ELISA Kit 人脾臟酪激酶(Syk)檢測試劑盒

HumanATP-bindingcassetteanspoerA1,ABCA1ELISAKit 人腺苷三0酸結合 96T/48T 進口分裝

HumanADisiegrinAndMetalloprotease10,ADAM10檢測試劑盒人解整合素樣金屬蛋白酶10(ADAM10)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

正常男性人體肝組織S9組分(5毫克/毫升)500微升

MouseAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠精原干細胞小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗心肌抗體(AMA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝